一、液相色譜中流動相需具備的特點(diǎn)

   液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點(diǎn)：

a、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時(shí)間保留在柱中)。

b、流動相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)

c、流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。

d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

e、流動相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。

f、在流動相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

二、高效液相色譜儀流動相的配制

高效液相色譜法中的流動相主要用水性溶劑、有機(jī)溶劑或它們的混合液，但是如何配制。選擇配制的方法不同，分析結(jié)果特別是保留時(shí)間，是會有顯著差別的。具體如下：

高效液相色譜法中的流動相主要用水性溶劑、有機(jī)溶劑或它們的混合液，水性溶劑也常用于緩沖液。常因資料上表示的內(nèi)容和實(shí)際的配制方法不同，而產(chǎn)生流動相的差異，影響了色譜圖和分析結(jié)果。一般來說，溶劑的混合按體積比（V/V）或重量比（W/W）進(jìn)行。溶液的體積因溫度而變化，所以按重量比混合可調(diào)制再現(xiàn)性較好的混合溶劑，但由于操作較麻煩，通常多用體積比混合。只要沒有特別標(biāo)明，就可按體積比進(jìn)行混合，但在特殊情況下，如胺類粘度高的溶液混合時(shí)，有時(shí)用重量—體積比（W/V）的方法。

1、有機(jī)溶劑和水性溶劑的混合方法

有機(jī)溶劑和水性溶劑的混合液作為流動相是經(jīng)常的，但由于混合方法不同，有時(shí)分析結(jié)果相差很大。如20mM磷酸鈉緩沖液（pH2.5）90%與乙腈10%的混合液，混合比為9∶1時(shí)，20mM 磷酸鈉緩沖液（pH2.5）90%與乙腈10%的體積比為9∶1，也就是可以解釋為各自按體積比例的相當(dāng)量稱取后進(jìn)行混合。另外，按10%乙腈解釋，用20mM 磷酸鈉緩沖液（pH2.5），將乙腈稀釋調(diào)制也可以成立。在后者情況下，產(chǎn)生混合體積減少部分，余下的添加20mM 磷酸鈉緩沖液。兩者雖然沒有太大的差別，但由于混合方式不同，分析結(jié)果，特別是保留時(shí)間，

也會有顯著的差別，這點(diǎn)必須注意。

2、50%或（V/V＝1/1）乙腈水溶液的配制方法

對于用V/V＝1/1的表示配制乙腈水溶液，多按這種方法進(jìn)行：用量筒測定乙腈500mL，用另一量筒測定水500mL，兩種液體在瓶內(nèi)充分搖晃混合。不過 50%乙腈水溶液的表示時(shí)，同樣也多是按上述方法配制，但查化學(xué)辭典時(shí)，實(shí)際上是按這種方法進(jìn)行配制：首先將500mL乙腈，注入1L的量瓶中，量瓶邊攪拌邊加水，等待液溫達(dá)到室溫，用全量水，使溶液到1L。這樣一來，用%表示和“V/V”體積比表示，最終得出的流動相組成不同。也就是說，混合溶劑的密度，與由原溶劑密度計(jì)算的單純平均值不相同，所以用上述兩種方法調(diào)制的流動相組成差異。如在室溫（25℃）附近水50mL和乙腈50mL混合時(shí)體積不是100mL，而有所減少，約為96mL。在一般情況下，多用操作簡便的第一種方法。

3、溶劑體積的溫度影響

如前所述，溶液的密度受周圍溫度的影響。剛從溶劑冷藏箱拿出來的溶液溫度與實(shí)驗(yàn)室的室溫相比，要低不少，乙腈和水混合液因發(fā)熱反應(yīng)，溶液溫度升高。因此，為能調(diào)制再現(xiàn)性好的流動相，建議在使用前用恒溫水浴鍋將液溫調(diào)到接近室溫。

4、、用兩臺泵進(jìn)行溶劑混合

在反相分析中，常用的有機(jī)溶劑和水的等濃度法，使用高壓兩元梯度系統(tǒng)，用兩臺泵將流動相分別輸液后混合等封閉式混合時(shí)與預(yù)先在瓶內(nèi)混合后用1臺泵輸液時(shí)，因混合后體積變化的不同，保留時(shí)間也有所不同，一定要注意。不僅是流動性的調(diào)制方法，試樣溶液和其他溶液的調(diào)制也經(jīng)常有上述問題，另外，在不同部門（醫(yī)藥部門或化工部門）各自都有自己的常識和習(xí)慣。在這種情況下，就要求各部門在制作相關(guān)溶液配制方法時(shí)能規(guī)定通則，定義設(shè)計(jì)溶液的調(diào)制方法，這樣避免混亂，以在日常工作中更好地記住這些表示方法。