一、二噁英介紹

二噁英，是多氯二苯并對(duì)二噁英(PCDDs)和多氯二苯并呋喃(PCDFs)這兩大類化合物的通稱。PCDDs有75種異構(gòu)體，PCDFs有135種異構(gòu)體，共有210種化合物。這些異構(gòu)體的毒性因結(jié)構(gòu)不同而存在差異，在所有的異構(gòu)體中，毒性最強(qiáng)的是2,3,7,8-四氯代雙苯并二噁英(TCDD)，其毒性相當(dāng)于氰化鉀的1000倍以上，是目前發(fā)現(xiàn)的無意識(shí)合成的副產(chǎn)品中毒性最強(qiáng)的化合物，被稱為“地球上最強(qiáng)的毒物”。據(jù)報(bào)道，只要28.35 g TCDD，就能將100萬人置于死地。

二噁英是非常穩(wěn)定的親脂性固體有機(jī)物，熔點(diǎn)較高，分解溫度大于700℃，極難溶于水，容易在生物體內(nèi)累積。二噁英蒸汽壓極低，因而其存在于大氣氣溶膠顆粒物上。

二噁英可以通過皮膚、呼吸道、消化道等途徑進(jìn)入人體，但通過食物特別是脂類，經(jīng)消化道進(jìn)入人體的量要占90%以上，它們蓄積于脂肪與肝臟，達(dá)到一定程度，便會(huì)造成許多不良影響。

二、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

 目前，二噁英的檢測(cè)方法以高分辨氣相色譜(HRGC)—高分辨質(zhì)譜(HRMS)為主，但在樣品前處理方法上存在較大差異。下面給出一些二噁英類物質(zhì)檢測(cè)的方法標(biāo)準(zhǔn)。

1、國標(biāo)

GB 5009.205-2013 食品中二噁英及其類似物毒性當(dāng)量的測(cè)定

GB/T28643-2012飼料中二噁英及二噁英類多氯聯(lián)苯的測(cè)定同位素稀釋-高分辨率氣相色譜/高分辨率質(zhì)譜法

GB/T 5009.190-2006 食品中指示性多氯聯(lián)苯含量的測(cè)定

2、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

HJ 77.1-2008 水質(zhì) 二噁英類的測(cè)定同位素稀釋高分辨氣相色譜-高分辨質(zhì)譜法

HJ 77.2-2008 環(huán)境空氣和廢氣 二噁英類的測(cè)定同位素稀釋高分辨氣相色譜-高分辨質(zhì)譜法

HJ 77.3-2008 固體廢物 二噁英類的測(cè)定同位素稀釋高分辨氣相色譜-高分辨質(zhì)譜法

HJ 77.4-2008 土壤和沉積物 二噁英類的測(cè)定同位素稀釋高分辨氣相色譜-高分辨質(zhì)譜法

3、國際標(biāo)準(zhǔn)化組織標(biāo)準(zhǔn)

ISO 18073:2004 同位素稀釋-高分辨色譜/高分辨質(zhì)譜法測(cè)定水中二噁英/呋喃

ISO 17858:2007 高分辨色譜/高分辨質(zhì)譜法測(cè)定水中二噁英類多氯聯(lián)苯

為了進(jìn)一步限制二噁英的排放，從2016年1月1日起，生活垃圾焚燒行業(yè)執(zhí)行新的標(biāo)準(zhǔn)(GB18485-2014 《生活垃圾焚燒污染控制標(biāo)準(zhǔn)》)，所有生活垃圾焚燒爐煙氣中二噁英的排放限值由之前的1.0ng TEQ/m3降低到0.1ng TEQ/m3。

三、檢測(cè)方案說明

那么，二噁英(dioxin)我們又該如何檢測(cè)呢？下面是幾種不同檢測(cè)方法的比較：

1、化學(xué)儀器分析方法

在200余種異構(gòu)體中分離出17種有明顯毒性的二噁英 ，分別測(cè)定其濃度或含量。將濃度或含量乘以每種二噁英的毒性因子（TEF）就可以得到總毒性當(dāng)量（TEQ）。該方法的一般程序包括采樣、提取、凈化、定性定量。

1.1.采樣　

樣品的取樣量由樣品類型、污染水平和方法的檢測(cè)限而定。各國對(duì)采樣程序都單獨(dú)編制了標(biāo)準(zhǔn)方法。

1.2 提取

為 了測(cè)定提取凈化效率和校正分析丟失，首先加入17種13C－PCDD/Fs采樣內(nèi)標(biāo)和37Cl－2,3,7,8－TCDD凈化內(nèi)標(biāo)。溶劑選擇和提取步驟取 決于樣品類型和凈化方法，如在處理廢棄物焚燒飛灰時(shí)溶劑選取石油醚/甲苯/二氯甲苯，在處理脂肪樣品時(shí)溶劑選取二氯甲烷/己烷。提取步驟一般包括溶解、振 蕩、混勻和萃取。索氏萃取是傳統(tǒng)的提取方法，廣泛應(yīng)用于檢測(cè)飛灰、魚、牛乳和脂肪組織樣品中的二噁英。目前，超臨界流體萃取裝置（SFE）、加壓加熱型的 高速溶劑萃取裝置（ASE）和微波萃取方法也用于提取樣品中的二噁英，并有大量對(duì)比實(shí)驗(yàn)證明了這些方法的有效性。

1.3凈化　

為了除去大量干擾物質(zhì)，目前大多采用色譜法進(jìn)行凈化。色譜法通常將分配處理柱和色譜柱串聯(lián)使用，包括酸或堿處理、硅膠柱、氧化鋁柱、佛羅里柱和活性炭柱的二 次凈化，具體操作因樣品類型和基質(zhì)性質(zhì)而異。目前，一些實(shí)驗(yàn)室正在開發(fā)一次性多層柱（如微型氧化鋁柱）和HPLC凈化方法來簡(jiǎn)化凈化過程。凈化后要加入 15種13C－PCDD/Fs定量?jī)?nèi)標(biāo)和2個(gè)13C標(biāo)記的用于確定色譜保留時(shí)間的內(nèi)標(biāo)。

1.4　定性定量　

通常定性檢測(cè)采用2類不同極性的色譜柱。首先用非極性或弱極性固定相將氯原子取代數(shù)相同的二噁英化合物分為1組，然后用極性固定相分離其中的異構(gòu)體，最后 通過對(duì)17 種標(biāo)記的和未標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)樣品實(shí)施比

較，獲取保留時(shí)間。定量檢測(cè)主要采用選擇離子監(jiān)測(cè)技術(shù)（SIM），以13C穩(wěn)定同位素為內(nèi)標(biāo)，根據(jù)測(cè)量目的用質(zhì)量校正程序校正質(zhì)譜模式、分辨率（M/?M=10,000以上，10％谷峰）等，并儲(chǔ)存質(zhì)量校正結(jié)果。對(duì)氯不同取代程度的異構(gòu)體分別定量。儀 器可選擇高分辨質(zhì)譜儀（HRMS）、四級(jí)桿低分辨質(zhì)譜儀（LRMS）。

2、生物學(xué)檢測(cè)方法

目前建立的生物學(xué)檢測(cè)方法均是通過對(duì)Ah受體活化程度的測(cè)定來間接表達(dá)二噁英的TEQ。

2.1　EROD細(xì)胞培養(yǎng)法　

二噁英與Ah受體結(jié)合活化后，被Ah受體核轉(zhuǎn)位因子（ARNT）轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)，活化的核內(nèi)基因是特異性DNA片段即二噁英響應(yīng)因子（DRE）。啟動(dòng)發(fā)揮 毒性的基因并增加其轉(zhuǎn)錄，從而激活EROD酶的活性。所以通過測(cè)定EROD酶的活性，可以了解二噁英激活A(yù)h受體的能力，進(jìn)而獲得測(cè)試樣品中二噁英的 TEQ。

2.2　螢光素酶方法　　

該方法是將螢火蟲螢光素酶作為報(bào)告基因結(jié)合到控制轉(zhuǎn)錄的DRE上，制備成質(zhì)粒載體并轉(zhuǎn)染H4IIE大白鼠肝癌細(xì)胞系（含Ah受體傳導(dǎo)途徑的各個(gè)部件）。以此構(gòu)成的CALUX系統(tǒng)螢光素酶誘導(dǎo)活性與二噁英的毒性系數(shù)相對(duì)應(yīng)，最終測(cè)定的結(jié)果也是TEQ。

2.3　 EIA酶免疫方法　

該 方法是根據(jù)鼠單克隆抗體DD3與二噁英結(jié)合的特點(diǎn)而建立的競(jìng)爭(zhēng)抑制酶免疫方法。使用酶競(jìng)爭(zhēng)配合物（HRP）和樣品中二噁英共同競(jìng)爭(zhēng)有限的DD3抗體的特異 性結(jié)合位點(diǎn),以一系列不同濃度的2,3,7,8－TCDD為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，作出2,3,7,8-TCDD標(biāo)樣與對(duì)應(yīng)樣品的劑量－效應(yīng)曲線，樣品中二噁英毒性強(qiáng) 度以計(jì)算出的TCDD毒性等價(jià)濃度間接表示。最終通過測(cè)定DD3與HRP螯合物的熒光強(qiáng)度來獲取二噁英的TEQ。螯合物的熒光強(qiáng)度與二噁英的TEQ成反比 。

2.4　DELFIA熒光免疫法　

DELFIA（Dissociation-enhancementLanthanide Fluoro Immunoassay）法屬于時(shí)間分辨熒光免疫分析法。該方法利用生物基因技術(shù)選擇出合適的抗原鍵合銪離子與樣品中二噁英競(jìng)爭(zhēng)單克隆抗體，待免疫反應(yīng)完 全后加入熒光增強(qiáng)液,使銪離子從抗原中解離下來，進(jìn)入增強(qiáng)液,形成膠束，高效地發(fā)出熒光。螯合物最終用時(shí)間分辨熒光法分析，其熒光強(qiáng)度與二噁英的TEQ成反比。

（文章來源儀器信息網(wǎng)）

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