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高效液相色譜圖常見故障及解決方法
點(diǎn)擊: 次 時(shí)間:2017-07-11 11:10
隨著色譜技術(shù)的發(fā)展，色譜法不僅可以用于分離有色物質(zhì)，而且廣泛地運(yùn)用于分離無色物質(zhì)，尤其是有機(jī)化合物。液相色譜中的許多問題都能在譜圖上反映出來，其中有一些問題可以通過改變?cè)O(shè)備參數(shù)得到解決;而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對(duì)于色譜柱和流動(dòng)相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。
一、拖尾峰
1. 篩板阻塞，柱子兩頭的過濾篩板如果堵塞，樣品就會(huì)在篩板部分受阻而形成時(shí)間延遲，使得樣品在柱后流出時(shí)峰型形成拖尾。需要通過反沖色譜柱，或者更換篩板。
2. 色譜柱塌陷，是指色譜柱由于其它原因引起了柱效率喪失，不能對(duì)物質(zhì)形成保留，使得物質(zhì)不在固定相上保留而隨流動(dòng)相流出，但是又還有一點(diǎn)柱效，因此形成拖尾。需要重新填充色譜柱或者更換色譜柱。
3. 有污染，即樣品不在同一起跑線起跑，從后面開始跑得到達(dá)終點(diǎn)稍晚，表現(xiàn)出拖尾。更換色譜柱或者采用有機(jī)溶劑梯度洗脫1h以上，以沖洗柱子。
4. 流動(dòng)相PH值選擇錯(cuò)誤，如某PH下有的樣品存在分子型和離子型的動(dòng)態(tài)平衡，離子型的陸續(xù)向分子型轉(zhuǎn)化就會(huì)表現(xiàn)出拖尾。調(diào)節(jié)PH值可抑制分子解離，改善拖尾，對(duì)于堿性化合物，相對(duì)較低的PH值更有利于得到對(duì)稱峰。
二、前沿峰
1. 樣品過載，被保留的樣品在正常出峰時(shí)間前陸續(xù)出來，形成前沿峰。降低樣品含量。
2. 樣品溶劑選擇不恰當(dāng)，當(dāng)樣品溶劑的洗脫能力大大強(qiáng)于流動(dòng)相時(shí)會(huì)出現(xiàn)前沿峰，例如，在反相色譜中用已腈做樣品溶劑，而流動(dòng)相的洗脫力較弱時(shí)會(huì)出現(xiàn)前沿峰。選擇流動(dòng)相或者接近流動(dòng)相的比例作為樣品溶劑。
3. 色譜柱損壞，色譜柱柱效損失，不能對(duì)物質(zhì)形成保留。更換色譜柱。
4. 在大峰前有小峰出現(xiàn)，假象前沿峰，即大峰前包埋了沒有分開的小峰。調(diào)整流動(dòng)相洗脫梯度。
三、基線漂移
1. 柱溫波動(dòng)，即使是很小的溫度變化都會(huì)引起基線的波動(dòng)，通常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類檢測(cè)器。使用柱溫箱，控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，在檢測(cè)器之前使用熱交換器。
2. 流動(dòng)相不均勻，流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。使用HPLC級(jí)的溶劑，流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣處理。
3. 流通池被污染或有氣體。用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。
4. 流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化。更改配比或流速，為避免這個(gè)問題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。
5. 樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)，以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。
四、出現(xiàn)寬峰
1. 色譜柱污染或失效，造成塔板數(shù)降低。更換同樣類型的色譜柱，如果新柱子可以提供對(duì)稱的色譜峰，則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。
2. 柱子與檢測(cè)器之間的管路太長(zhǎng)或管路內(nèi)徑太大。更換內(nèi)徑較小的短管路。
3. 檢測(cè)器對(duì)反應(yīng)時(shí)間或池體積響應(yīng)過大。減少響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流通池。
五、基線噪音
1. 在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣(尖銳峰)。流動(dòng)相脫氣，沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣。
2. 漏液。檢查管路接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。
3. 流動(dòng)相混合不完全。用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑。
4. 溫度影響(柱溫過高，檢測(cè)器未加熱)。使用柱溫箱，減少溫度差異或加上熱交換器。
5. 在同一條線上有其他電子設(shè)備(偶然噪聲)。斷開LC、檢測(cè)器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。 采用精密級(jí)穩(wěn)壓電源。
六、分離度不夠
1.流動(dòng)相梯度洗脫設(shè)置不合理。優(yōu)化梯度洗脫程序。
2.流動(dòng)相污染或變質(zhì)(引起保留時(shí)間變化)。重新配置流動(dòng)相。
3. 保護(hù)柱或分析柱阻塞。去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析，如果必要?jiǎng)t更換保護(hù)柱;如果分析柱阻塞，可進(jìn)行反沖;如果問題仍然存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞，建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦?如果問題仍然存在，進(jìn)口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。
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一、拖尾峰
1. 篩板阻塞，柱子兩頭的過濾篩板如果堵塞，樣品就會(huì)在篩板部分受阻而形成時(shí)間延遲，使得樣品在柱后流出時(shí)峰型形成拖尾。需要通過反沖色譜柱，或者更換篩板。
2. 色譜柱塌陷，是指色譜柱由于其它原因引起了柱效率喪失，不能對(duì)物質(zhì)形成保留，使得物質(zhì)不在固定相上保留而隨流動(dòng)相流出，但是又還有一點(diǎn)柱效，因此形成拖尾。需要重新填充色譜柱或者更換色譜柱。
3. 有污染，即樣品不在同一起跑線起跑，從后面開始跑得到達(dá)終點(diǎn)稍晚，表現(xiàn)出拖尾。更換色譜柱或者采用有機(jī)溶劑梯度洗脫1h以上，以沖洗柱子。
4. 流動(dòng)相PH值選擇錯(cuò)誤，如某PH下有的樣品存在分子型和離子型的動(dòng)態(tài)平衡，離子型的陸續(xù)向分子型轉(zhuǎn)化就會(huì)表現(xiàn)出拖尾。調(diào)節(jié)PH值可抑制分子解離，改善拖尾，對(duì)于堿性化合物，相對(duì)較低的PH值更有利于得到對(duì)稱峰。
二、前沿峰
1. 樣品過載，被保留的樣品在正常出峰時(shí)間前陸續(xù)出來，形成前沿峰。降低樣品含量。
2. 樣品溶劑選擇不恰當(dāng)，當(dāng)樣品溶劑的洗脫能力大大強(qiáng)于流動(dòng)相時(shí)會(huì)出現(xiàn)前沿峰，例如，在反相色譜中用已腈做樣品溶劑，而流動(dòng)相的洗脫力較弱時(shí)會(huì)出現(xiàn)前沿峰。選擇流動(dòng)相或者接近流動(dòng)相的比例作為樣品溶劑。
3. 色譜柱損壞，色譜柱柱效損失，不能對(duì)物質(zhì)形成保留。更換色譜柱。
4. 在大峰前有小峰出現(xiàn)，假象前沿峰，即大峰前包埋了沒有分開的小峰。調(diào)整流動(dòng)相洗脫梯度。
三、基線漂移
1. 柱溫波動(dòng)，即使是很小的溫度變化都會(huì)引起基線的波動(dòng)，通常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類檢測(cè)器。使用柱溫箱，控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，在檢測(cè)器之前使用熱交換器。
2. 流動(dòng)相不均勻，流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。使用HPLC級(jí)的溶劑，流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣處理。
3. 流通池被污染或有氣體。用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。
4. 流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化。更改配比或流速，為避免這個(gè)問題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。
5. 樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)，以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。
四、出現(xiàn)寬峰
1. 色譜柱污染或失效，造成塔板數(shù)降低。更換同樣類型的色譜柱，如果新柱子可以提供對(duì)稱的色譜峰，則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。
2. 柱子與檢測(cè)器之間的管路太長(zhǎng)或管路內(nèi)徑太大。更換內(nèi)徑較小的短管路。
3. 檢測(cè)器對(duì)反應(yīng)時(shí)間或池體積響應(yīng)過大。減少響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流通池。
五、基線噪音
1. 在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣(尖銳峰)。流動(dòng)相脫氣，沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣。
2. 漏液。檢查管路接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。
3. 流動(dòng)相混合不完全。用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑。
4. 溫度影響(柱溫過高，檢測(cè)器未加熱)。使用柱溫箱，減少溫度差異或加上熱交換器。
5. 在同一條線上有其他電子設(shè)備(偶然噪聲)。斷開LC、檢測(cè)器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。 采用精密級(jí)穩(wěn)壓電源。
六、分離度不夠
1.流動(dòng)相梯度洗脫設(shè)置不合理。優(yōu)化梯度洗脫程序。
2.流動(dòng)相污染或變質(zhì)(引起保留時(shí)間變化)。重新配置流動(dòng)相。
3. 保護(hù)柱或分析柱阻塞。去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析，如果必要?jiǎng)t更換保護(hù)柱;如果分析柱阻塞，可進(jìn)行反沖;如果問題仍然存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞，建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦?如果問題仍然存在，進(jìn)口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。
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